Klinická farmakologie a farmacie – 2/2020

KLINICKÁ FARMAKOLOGIE A FARMACIE / Klin Farmakol Farm 2020; 34(2): 56–62 /  www.klinickafarmakologie.cz 58 HLAVNÍ TÉMA Laboratorní metody v terapeutickém monitorování léků Nevýhodou imunoanalytických metod je možný výskyt zkřížených reakcí s metabolity léčiv, což vede k falešnému navýšení jejich koncentrace. Především imunoanalytické metody s polyklo­ nálními protilátkami byly méně specifické a in­ terference se projevovala hlavně u léčiv s velkým množstvím metabolitů jako je např. cyklosporin A a takrolimus nebo u látek, kde došlo jen k malé změně struktury. Poprvé byla tato interference popsána u vankomycinu podávaného pacientům se sníženou funkcí ledvin, kdy docházelo k jeho kumulaci v organismu a následné přeměně van­ komycinu na látku strukturálně blízkou tzv. CDP (crystalic degradation protein), který vyvolával zvýšení koncentrace vankomycinu o více než 60 % (6). Podobně se chovaly metabolity cyk­ losporinu A, kde docházelo až ke 100 % navýšení koncentrace cyklosporinu A (7). Tyto poznatky vedly k rozvoji imunoanalytic­ kýchmetod s monoklonálními protilátkami a k je­ jich standardnímu testování na zkřížené reakce smetabolity i dalšími strukturálně blízkými látkami. Nově zaváděnémetody byly specifičtější a interfe­ rence, pokud k nimdocházelo, byly už podstatně menší. U cyklosporinu Abyly testovány především primární metabolity a prokázalo se, že metabolit AM1 zvyšuje koncentraci cyklosporinu A o 40 % u FPIA ametabolit AM9 o 20%u EMIT v porovnání s kapalinovou chromatografií (HPLC) (8). Na našem pracovišti jsme porovnávali cyklosporin Aměřený metodou RIA s monoklonální protilátkou s meto­ douHPLC a našli jsme významně rozdílné hodnoty především u nejvyšších koncentrací cyklosporinu A a také uAUC (9). Poměrně vysoké nadhodnocení koncentrace cyklosporinu A (53,7 %) a takrolimu (48,1 %) bylo zjištěno i při porovnání chemilumi­ niscenční metody CMIA a metody kapalinové chromatografie s hmotnostní detekcí LC‑MS/MS (10). Podobně jsme porovnávali výsledky vanko­ mycinu, získané metodou FPIA s monoklonální protilátkou ametodou LC‑MS/MS u tří skupiny paci­ entů, s normální a zvýšenou koncentrací kreatininu a u pacientů na dialýze. Pouze u dialyzovaných pacientů byla metodou FPIA naměřena koncen­ trace vankomycinu o 13 % vyšší (11). V tab. 1 je uveden přehled metod a počet stanovení některých léčivých látek na základě údajů z prvního cyklu EHK (Externího hodnocení kvality) RfB (Refereninstitut für Bioanalytik) pro rok 2019 CS1/19 a AK1/19. Do systému EHK musí být zapojeny všechny akreditované laboratoře s po­ žadovanou četností 2× ročně. Imunoanalytické metody s různým typem detekce zde stále tvoří významný podíl v rutinním TDM. Fyzikálně‑chemické metody Spektrofotometrie Spekrofotometrické metody se v analytice léčivých látek příliš nerozšířily, protože jejich po­ užití bylo limitováno jednak časovou náročností a také častým výskytem interferencí se současně podávanými léky nebo endogenními faktory. Např. koncentrace teofylinu měřená spektrofo­ tometricky v UV oblasti byla několikanásobně navýšena u pacientů s kotrimoxazolem jako vý­ sledek interference s jeho složkou sulfametoxa­ zolem, který má podobné absorpční maximum. U intoxikací paracetamolemmůže zase zvýšená koncentrace bilirubinu interferovat při jeho sta­ novení a ovlivnit kvalitu výsledku. Protože na kon­ centraci paracetamolu závisí dávkování antidota N‑acetylcysteinu, bylo použití této metody při zvýšené koncentraci bilirubinu nevhodné (12). Elektromigrační metody Elektromigrační metody jsou techniky, které využívají pohyb nabitých částic v elektrickémpoli a lze je použít pro detekci nízkomolekulárních i vy­ sokomolekulárních látek. Mezi přednosti těchto metod patří vysoká separační účinnost a nízká spotřeba vzorku i chemikálií, což v konečnémdů­ sledku vede ke snížení nákladů na analýzu. Mezi elektromigrační separační metody patří kapilární elektroforéza (CE) a její módy, tj. kapilární zónová elektroforéza (CZE) a nevodná zónová elektroforé­ za (NACE), micelární elektrokinetická kapilární chro­ matografie (MEKC), a izotachoforéza (ITP). Běžné postupy přípravy vzorku před vlastní analýzou zahrnují precipitaci proteinů, extrakci na tuhé fázi (SPE) nebo extrakci z kapaliny do kapaliny. U ně­ kterých stanovení lze využít i přímý nástřik vzorku. CE využívá k dělení látek kapiláru naplněnou základním elektrolytem, který vede proud a ná­ sledná separace je založena na odlišnosti elek­ troforetických mobilit iontů v elektrickém poli. Poloha píků určuje kvalitu a plocha nebo výška píků kvantitu analyzované látky. Jedná se o výkon­ nou separační techniku, která má vysoké rozlišení a podobný separační čas jako HPLC. Podobně je to u NACE, která se provádí v nevodném, přede­ vším metanolovém prostředí a MEKC, kde se na Time 3,93 3,96 PD 5,04 CMZ 5,22 PD 6,36 TOP 7,56 DPM 8,78 IS (V) (min) 0 2 4 6 8 10 12 1,0 0,8 0,6 0,4 0,2 0,0 Obr. 1.  Analýza antiepileptik metodou GLC Analýza antiepileptik plynovou chromatografií po derivatizaci trimethylfenylamoniumhydroxidem s termionickou detekcí. (PB – fenobarbital, CMZ – karbamazepin, PD – primi- don, TOP – topiramát, DPD – fenytoin aIS – vnitřní standard)