KLINICKÁ FARMAKOLOGIE A FARMACIE / Klin Farmakol Farm 2022;36(1):29-33 / www.klinickafarmakologie.cz 32 PŘEHLEDOVÉ ČLÁNKY Fyzikálně-chemické vlastnosti kolistinu a jejich dopady do klinické praxe lotní závislost – při -70°C a -80°C nepřesahuje degradace kolistinu po dobu 6–8 měsíců 7%, zatímcopři -20°Cbyl obdobný rozsahdegradace pozorován už po jednomměsíci. Podobná data publikoval Gobin a kolektiv (28). Na základě těchto výsledků je tedy zřejmé, že uchovávání vzorků při -20°C není vhodné a i při uchovávání při -80°C (resp. -70°C) by analýza měla být provedena do 4 měsíců od odběru (27). Praktickou otázkou je stabilita CMS a kolistinu v případě rozmrazení vzorku. Z dostupných dat vyplývá zachování stability při dvou (28), resp. třech (pouze kolistin) cyklech zmrazení/ rozmrazení (29, 30). Obecně CMS je v roztoku méně stabilní než kolistin, proto by při zpracování vzorků, kde je přítomnost CMS očekávatelná, měl být počet rozmrazení minimalizován. To souvisí i s transportemvzorků do analytické laboratoře. Při ponechání vzorku plazmy s CMS při pokojové teplotě dochází v řádu jednotek hodin k významnému vzestupu koncentrací de novo formovaného kolistinu (28). Za zmínku ještě stojí potenciál adsorpce kolistinu na některé plasty, především polystyren; naopak polypropylen vykazuje nižší riziko adsoprce (31). Příčinou jsou opět fyzikálně-chemické vlastnosti kolistinu, hlavně amfifilní charakter a pozitivní náboj jeho molekuly a rizikovým faktorem je práce se vzorkem v kapalném skupenství, počet expozic novým, nesaturovanýmpovrchůma koncentrace kolistinu (31). Jev adsorpce takmohl amůže sehrávat roli při určování MIC bakterií a stanovování PK/PD cílů a v kinetických studiích využívajících mikrodialýzu, či materiál získaný bronchoalveolární laváží. Při zpracovávání plazmy nebo séra preventují obsažené proteiny adsorpci kolistinu na plastové povrchy (31). Metody stanovení kolistinu a kolistin methansulfonátu Bylo publikovánomnohometod pro kvantifikaci kolistinu v biologické matrici, zahrnující chromatografii na tenké vrstvě, imunologické či mikrobiologickémetody nebo kapilární elektroforézu. Uvedenémetody všakpostrádají citlivost a selektivitu a jsou časově náročné. Optimální analytickámetoda byměla být rychlá, jednoduchá, přesná a dostatečně citlivá. Tytopodmínky v současnosti nejlépe splňuje spojení kapalinové chromatografie s hmotnostní detekcí (LC-MS), o čemž svědčí i nedávnopublikovanémetodiky (32, 33). Kolistin, také známý jako polymyxin E, je komplexní směs několika složek, z nichž dvě hlavní jsou kolistin A (polymyxin E1) a kolistin B (polymyxin E2). Při měření koncentrací kolistinu jsou stanovovány právě tyto dvě hlavní složky (2). Jak již bylo zmíněno, kolistin je podáván ve formě CMS. Vzhledem k nestabilitě molekuly CMS je prodrug stanovován nepřímo kyselou hydrolýzou příslušných vzorků a následným stanovením kolistinu (28, 32). Metody LC-MS/MS často využívají různé analytické kolony, mobilní fáze a chromatografické podmínky s cílem zkrátit dobu analýzy, zlepšit tvar píku či detekovat analyt při nízkých koncentracích. Ve většině metod pro detekci kolistinu byly pro chromatografickou separaci využity kolony C18, jako mobilní fáze voda a acetonitril obsahující 0,1%kyselinumravenčí a jako interní standard polymyxin B (32, 33). Většinametod také uvádí ionizaci elektrosprejem (ESI) v pozitivnímmódu. Prekurzorovémolekulární ionty colistinu mohout být jednou až trojnásobně nabité jako: [M+H]+, [M+2H]2+ a [M+3H]3+, při m/z 1170, 586, 391 pro kolistin A a 1156, 579, 386 pro kolistin B. Produktové ionty spolu s přehledemvybranýchmetod jsou uvedeny v Tabulce 1 (28, 34–42). Stanovení colistinu z biologickématricemetodou kapalinové chromatografie s hmotnostní detekcí je přesné a rychlé s vysokou citlivostí a specificitou. Závěr Kolistin je úzkospektré baktericidní lipopeptidové antibiotikum zachovávající si účinnost vůči gram-negativním patogenům, díky Tab. 1. Přehled vybraných LC-MS metod pro stanovení kolistinu a CMS Typ kolony IS MF Eluce Doba analýzy [min] Iontový přechod m/z Zdroj A B kolistin A kolistin B Xbridge C18 (150×2,1mm; 5µm) polymyxin B 0,1% kyselina mravenčí ve vodě 0,1% kyselina mravenčí v ACN isokratická A : B (80 : 20) 3,8 pozitiv 585,5 → 101,2 578,5 → 101,2 [28] Xbridge BEH-Amide (50×2,1mm; 2,5µm) HILIC × 0,1% kyselina mravenčí v ACN 0,1% kyselina mravenčí ve vodě gradientová 12 pozitiv 390,7 → 100,9 386,0 → 100,9 [34] Synergi Fusion RP C18 (150×2mm; 4μm) polymyxin B 0,1% kyselina mravenčí vodě 0,1% kyselina mravenčí v ACN gradientová 11 pozitiv 585,7 → 101,1; 202,3; 241,3 578,7 → 101,1; 202,3; 227,3 [35] Kinetex C18 (50×3mm; 2,6µm) polymyxin B 0,1% kyselina mravenčí ve vodě 0,1% kyselina mravenčí v ACN gradientová 6 pozitiv 585,5 → 101,1; 241,1 578,5 → 101,1; 227,2 [36] Acquity UPLC BEH C18 (100×2,1mm; 1,7µm) × 0,2% kyselina mravenčí a 5% ACN ve vodě ACN gradientová 10 pozitiv 390,60 → 101,07; 241,19 385,90 → 101,07; 227,17 [37] Atlantis dC18 (100×2,1mm; 3µm) klarithromycin voda 0,2% kyselina mravenčí v ACN isokratická A : B (50 : 50) 4 pozitiv 585,6 → 101,4 578,7 → 101,3 [38] Kinetex XB-C18 (100×2,1mm; 2,6μm) polymyxin B ACN : MeOH (1 : 1) 0,1% kyselina mravenčí ve vodě gradientová 3,5 pozitiv 390,7 → 101,3 386,0 → 101,2 [39] MassTox polymyxin B 0,1% kyselina mravenčí ve vodě 0,1% kyselina mravenčí v MeOH gradientová 3,5 pozitiv 585,5 → 534,9; 576 578,5 → 527,9; 568,9 [40] Acquity UPLC C18 (150×4,6mm; 3,5μm) polymyxin B 0,1% kyselina mravenčí ve vodě 0,1% kyselina mravenčí v ACN gradientová 2,5 pozitiv 390,9 → 385,1 386,2 → 101,0 [41] Acquity UPLC BEH C18 (50×2,1mm; 1,7µm) sulphadiazin 13C6 0,1% kyselina mravenčí ve vodě 0,1% kyselina mravenčí v ACN gradientová 3,5 pozitiv 390,8 → 86,1; 101,0 386,0 → 86,0; 101,1 [42] negativ 1 167,8 → 1 079,4; 1124,1 1 153,7 → 1 065,8; 1 110,0 IS – interní standard; MF – mobilní fáze; ACN – acetonitril; MeOH – methanol; x – není specifikováno nebo není použito
RkJQdWJsaXNoZXIy NDA4Mjc=